基因TOPO,Ⅱα、TUBB3、ERCC1在小儿肾母细胞瘤组织中的表达及其临床意义

侯玉玲 豆秀娟 李 壹

肾母细胞瘤是小儿实体肿瘤中常见的恶性肾脏肿瘤，发病率约占所有肿瘤的6%[1]。肾母细胞瘤早期无典型临床症状，且大部分患儿年龄较小，无法准确且自主描述体征，致使就医时已错过最佳时机。目前，CT、超声、磁共振等影像学检查是诊断肾母细胞瘤的常用手段，但早期缺乏特异性症状，行影像学检查时大部分患儿病情已发展至中晚期，治疗难度增加，大大影响了患儿的生存时间[2]。现阶段，手术及放化疗治疗是改善肾母细胞瘤患儿预后的重要方法，但于治疗前明确患儿具体的病变类型，对指导临床治疗具有重要的作用。拓扑异构酶Ⅱα(TOPO Ⅱα)、3型β微管蛋白编码基因(TUBB3)、核苷酸切除修复交叉互补基因(ERCC1)的mRNA异常表达与肾母细胞瘤间存在密切的联系，故对不同基因表达的患儿给予积极干预，有助于改善患儿预后[3]。鉴于此，本研究旨在探究TOPO Ⅱα、TUBB3、ERCC1基因表达与肾母细胞瘤临床病理特征的相关性。现报告如下。

1.1 一般资料

选择2018年4月至2020年3月我院收治的40例肾母细胞瘤患儿的病理组织标本，另同期采集距离肿瘤组织2～3 cm的癌旁组织标本作为对照。纳入标准：所有组织均经术后病理、影像学检查及实验室检查明确诊断，且所有患儿均为首次发病；
既往无放化疗治疗史；
病历资料完整；
患儿家属均自愿参与本次研究，签署知情同意书。排除标准：癌细胞已发生远端转移；
参与本研究前已接受其他治疗；
耐受性差，无法配合完成本次研究者。40例患儿中男24例，女16例；
年龄2～8岁，平均年龄(4.86±0.94)岁。

1.2 方法

(1)样本制备：肾母细胞瘤组织及癌旁组织标本均使用100 ml/L的甲醛溶液固定24 h，24 h后使用乙醇充分冲洗。(2)TOPO Ⅱα、TUBB3、ERCC1表达检测：依据分支-DNA液相芯片技术测定各组织标本中的TOPO Ⅱα mRNA、TUBB3 mRNA、ERCC1 mRNA水平。操作方法如下：在56 ℃环境下使用裂解液对标本行裂解操作3 h，加入缓冲液，在56 ℃环境下充分震荡，孵育过夜。将孵育板置于磁力架上，静置1 min，舍弃上层清液，使用洗涤液充分震荡清洗3 min，置于磁力架上60 s，舍弃上层清液，重复操作3次。于52 ℃环境下震荡后反应60 min，并放置于磁力架上1 min，舍弃上层清液后重复洗涤3次。使用洗涤液震荡洗涤3 min，获得最终荧光值。当TOPO Ⅱα≥40%，TUBB3≥60%，ERCC1 ≥60%时，为高表达；
当TOPO Ⅱα<40%，TUBB3<60%，ERCC1<60%时，为低表达。

1.3 观察指标

分析TOPO Ⅱα、TUBB3、ERCC1表达情况；
另分析TOPO Ⅱα、TUBB3、ERCC1与肾母细胞瘤患儿病理特征的相关性。

1.4 统计学分析

2.1 TOPO Ⅱα、TUBB3、ERCC1表达情况比较

癌组织中TOPO Ⅱα、TUBB3、ERCC1高表达率均高于癌旁组织，中低表达率低于癌旁组织，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 TOPO Ⅱα、TUBB3、ERCC1表达情况比较(例，%)

2.2 TOPO Ⅱα、TUBB3、ERCC1表达与肾母细胞瘤患儿病理特征的关系

TOPO Ⅱα高表达患者病理分期Ⅲ～Ⅳ占比率高于中低表达患者，差异有统计学意义(P<0.05)；
ERCC1高表达患者病理分期Ⅲ～Ⅳ占比率高于中低表达患者，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 TOPO Ⅱα、TUBB3、ERCC1表达与肾母细胞瘤患儿病理特征的关系(例，%)

手术及术后放化疗是治疗肾母细胞瘤的常用方法，在改善患儿预后中意义重大。大量数据显示[4]，肾母细胞瘤患儿术后5年生存率可达87%。在临床治疗中不仅仅需要确保临床疗效，还需减轻放化疗产生的毒副作用，以提高患儿的生存及生活质量。既往传统治疗易引起患儿全身性或中枢神经系统毒性反应，加之肿瘤细胞对化疗药物的耐受性，使得化疗效果受到影响[5]。此外，不同基因在不同过程中产生的作用是导致多重耐药性的主要因素，也是引发肾母细胞瘤发生及发展的重要原因[6]。故治疗前明确基因表达对指导临床治疗、评估治疗效果意义重大。

TOPO Ⅱα基因通过编码DNA TOPO Ⅱ在DNA中的复制、转录、翻译中意义重大，并可促进肿瘤细胞增殖。研究显示[7]，TOPO Ⅱα低表达者对化疗药物中的蒽环类及依托泊苷类均存在较强的耐药性，但高表达者对上述两种药物较为敏感。TUBB3基因具有编码-tubulin-Ⅲ蛋白的作用，其异常表达与抗微管类药物及肿瘤的发生及发展密切相关[8]。ERCC1水平高低在DNA的修复中影响较大，其异常表达与多种恶性肿瘤发生及发展联系密切，如肝癌、肺癌、结直肠癌等。ERCC1高表达及低表达在铂类药物治疗中受益较大[9]。本研究结果显示，癌组织中TOPO Ⅱα、TUBB3、ERCC1高表达率均高于癌旁组织，中低表达率低于癌旁组织；
TOPO Ⅱα高表达者病理分期Ⅲ～Ⅳ发生率高于中低表达者，ERCC1高表达者病理分期Ⅲ～Ⅳ发生率高于中低表达者，提示TOPO Ⅱα与患儿病理分期有关。究其原因可知TOPO Ⅱα表达水平随着病理分期的加重而升高，由此可推测晚期的肾母细胞瘤患儿对依托泊苷类及蒽环类药物较为敏感。另TUBB3表达有助于促进及维持细胞的正常生理活动，其异常表达在肾母细胞瘤的发生及发展中具有重要作用；
ERCC1的高表达率与肾母细胞瘤病理分期密切相关[10]。由此可见，肾母细胞瘤患儿机体内出现大量的DNA受损，肿瘤恶性程度越高，DNA损伤越多，基因组织表达稳定性越差。

综上所述，TOPO Ⅱα、TUBB3、ERCC1在肾母细胞瘤患儿中表达水平高于癌旁组织，其中TOPO Ⅱα、ERCC1高表达与疾病病理分期相关。