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[摘要] 目的 探讨丙型肝炎患者白介素-2（IL-2）与肝功能及丙型肝炎病毒RNA（HCV-RNA）的相关性情况。方法 收集南阳市中心医院2009年1月～2014年1月收治的丙型肝炎患者60例作为丙型肝炎组，同时选取同期健康体检者100例作为对照组。采用全自动生化分析仪检测谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、总胆红素（TBIL）、直接胆红素（DBIL）情况，采用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测IL-2，采用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测HCV-RNA情况。分析丙型肝炎患者IL-2与HCV-RNA、肝功能的相关性。 结果 丙型肝炎组IL-2、ALT、AST、TBIL、DBIL水平均高于对照组，差异均有统计学意义（t = 29.85、72.02、48.82、43.19、31.32，均P < 0.05），丙型肝炎患者IL-2与HCV-RNA呈负相关（r = -0.429，P < 0.05），与ALT、AST呈正相关性（r = 0.503、0.512，P < 0.05）。 结论 丙型肝炎患者血清中的IL-2水平表达增高，HCV可促进IL-2的分泌，并与肝功能损伤有关。
[关键词] 丙型肝炎；IL-2；肝功能；HCV-RNA
[中图分类号] R512.63 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2015）01（c）-0085-03
丙型肝炎是常见的经血液传播传染性疾病，目前全世界有1.5亿人感染丙型肝炎，其中有近60%发展成慢性肝病，有20%逐步演变为肝硬化。丙型肝炎起病隐匿，临床症状不明显[1-2]，有近80%急性感染期患者无明显的临床症状。同时丙型肝炎检测普及率、公众认知度较低，潜伏期长，临床上漏诊率大，在得不到及时治疗的情况下，易演变成肝硬化和肝癌。丙型肝炎作为炎性反应容易引起一些炎症因子的变化，如白介素不同程度的变化，白介素-2（IL-2）是常见炎症因子之一，其变化与丙型肝炎发生发展有着重要的关系。本研究通过对丙型肝炎患者临床资料进行分析，拟探讨丙型肝炎患者IL-2与肝功能及HCV-RNA的相关性，现将研究结果报道如下：
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取南阳市中心医院（以下简称“我院”）2009年1月～2014年1月收治的丙型肝炎患者60例作为丙型肝炎组，其中男31例，女19例，年龄19～54岁，平均（36.7±10.5）岁；患者有不同程度的发热、头痛、乏力、纳差、恶心、呕吐，肝脏肿大、质地偏软，临床检查均为丙型肝炎抗体阳性患者。选取同期我院健康体检者100例作为对照组，其中男65例，女35例，年龄20～56岁，平均（35.2±11.8）岁。两组一般资料比较，差异无统计学意义（P > 0.05），具有可比性。
1.2 方法
两组研究对象抽取晨起空腹静脉血5 mL，离心机3000 r/min，离心15 min，分离血清，放置-70℃冰箱冻存。
1.2.1 IL-2检测 采用酶联免疫吸附测定ELISA方法，应用尚柏生物医学技术有限公司生产的IL-2试剂盒，通过双抗体两步法夹心酶联免疫吸附试验检测。标准品和待测样本加入已经包被了人IL-2单克隆抗体透明酶标包被板之中，通过温箱孵育一定时间，将没有完全结合的成分冲洗出去，加入酶标工作液，通过温箱孵育，将没有完全反应的成分洗涤出去。先后顺序加入底物A和底物B，底物TMB在辣根过氧化物酶的催化下转变为蓝色产物，通过酸作用下逐渐变为黄色，黄色的深浅程度和样品中IL-2浓度呈现明显的正相关。通过分光光度计在450 nm波长之下测定OD值，按照说明书要求计算IL-2的含量。IL-2标准品的回归方程式，计算样品浓度。样品的浓度=计算样品浓度×稀释倍数。
1.2.2 丙型肝炎RNA定量检测 主要是采用QIAamp Viral RNA Mini Kit按照说明书对丙型肝炎病毒RNA进行提取。通过丙型肝炎病毒核酸扩增荧光定量检测试剂盒，实施RT-PCR，首先引物和探针的设计选择了5"非编码区，对其进行扩增，扩增成为156 bp的片段，在LightCycler 2.0上进行扩增检测，加上体积为15 μL样品，10 μL的试剂，建立总体积达到25 μL的反应体系。通过定量PCR，对标本中的丙型肝炎RNA进行定量分析。
1.2.3 肝功能的各项指标检测 谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、总胆红素（TBIL）、直接胆红素（DBIL）情况采用全自动生化分析仪进行检测。
1.3 观察指标
观察两组IL-2、ALT、AST、TBIL、DBIL。
1.4 统计学方法
采用统计学软件SPSS 19.0对数据进行分析，正态分布计量资料以均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用t检验；计数资料以率表示，采用χ2检验；相关性采用直线相关分析。以P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 两组的IL-2、ALT、AST、TBIL、DBIL情况
丙型肝炎组IL-2、ALT、AST、TBIL、DBIL水平均高于对照组，差异均有统计学意义（均P < 0.05）。见表1。
2.2 丙型肝炎患者IL-2和HCV-RNA、ALT、AST相关性
丙型肝炎患者IL-2与HCV-RNA呈负相关（r = -0.429，P < 0.05），与ALT、AST呈正相关（r = 0.503、0.512，P < 0.05）。
3 讨论
由于丙型肝炎病毒诱发严重的肝脏系统损伤，目前我国大概有4000万丙型肝炎患者，其中80%有不同程度的慢性肝病，近30%患者发展成为肝硬化，10%肝硬化患者演变为肝癌。丙型肝炎患者有不同程度的疲劳无力、食欲衰减、皮肤发生瘀青，但是有部分患者没有明显的症状，机体处于一种亚健康状态[3-4]。如果临床治疗不及时，很容易演变为肝硬化、肝癌。ALT和AST是肝功能评价的重要指标，如果两项指标高于40 U可以提示肝功能异常[5-6]。
ALT反映的是肝病的活动程度，AST反映的是肝细胞损害的严重程度[7-8]。当肝细胞受到轻度损伤，细胞膜通透性明显增加，细胞中的ALT溢出，当肝细胞损伤的较为严重，甚至发生坏死时，线粒体中的AST会释放出来，因而AST/ALT比例明显降低，病情严重时上述比例会明显升高[9-10]。如果AST/ALT > 1提示肝细胞有广泛的坏死；如果AST/ALT<1提示有慢性肝炎，如果AST/ALT > 2则说明可能存在肝硬化[11-12]。在肝细胞坏死时，0.31≤AST/ALT≤0.63提示预后较好，在1.20≤AST/ALT≤2.26提示患者将发展成为肝衰竭甚至病死[13-14]。
胆红素是由红蛋白转变而来，胆红素是血液中红细胞血红素进行代谢之后的废弃物，其可以在肝脏的作用下，通过胆管排出到十二指肠中[15-16]。引起胆红素偏高的原因较多，如慢性肝炎、肝硬化、急性黄疸、肝坏死等，另外溶血型黄疸和血型不吻合的输血反应等也可能引起胆红素升高[17-19]。
IL-2又称T细胞生长因子，其是由活化的CD4+ T细胞和CD8+ T细胞产生的具有广泛生物活性的细胞因子，也是所有T细胞亚群的生长因子，同时促进活化B细胞增殖，故为调控免疫应答的重要因子，此外其还参与抗体反应、造血和肿瘤监视。IL-2属于Th1类细胞因子，可以促进CD4+ T细胞、CLTs和B细胞增殖。当急性丙肝病毒感染向自限性发展时，其会出现IL-2升高，而向着慢性感染发展时，IL-2水平明显降低。另外IL-2水平的变化还可以反映丙型肝炎抗病毒治疗情况。有资料显示[20-21]，单独CD4+ CD25+ T细胞按照1∶1共同培养，其分别加入不同浓度的IL-2，当IL-2浓度为2000 U/mL时，可以明显抑制CD4+ CD25+ T细胞增殖能力。
本研究结果表明，丙型肝炎患者的IL-2、ALT、AST、TBIL、DBIL、HCV-RNA均高于健康人，丙型肝炎患者IL-2与HCV-RNA呈负相关，与ALT、AST呈正相关。说明丙型肝炎患者血清中的IL-2水平明显增高，丙型肝炎的病情发展会促进IL-2的分泌，其可以反映肝功能损伤情况。此外，IL-2介导免疫反应可以有效地促进体内丙型肝炎病毒清除，但也会因此加重肝细胞的损伤。
综上所述，丙型肝炎患者血清中的IL-2表达水平增高，HCV可促进IL-2的分泌，IL-2表达水平增高与肝功能损伤有关。
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（收稿日期：2014-10-13 本文编辑：苏 畅）
