材料和方法
1.1 实验材料
实验用鱼为罗非鱼，平均体重（17.03±5.21）g。实验前在塑料桶中暂养24 h，选择健康、体质量均匀的个体在塑料瓶（1 L、5 L）中进行实验。实验周期为360 min。
6种实验药品分别为：牛磺酸（A）、维生素C（B）、葡萄糖（C）、泼洒姜-芳草（D）、应激宝（E）、渔精元（F），主要成分及产地见表1。
1.2 实验方法
1.2.1 缺氧应激实验
向塑料瓶中注入1 L经曝气处理的蒸馏水，再加入20 mg/L的药品，每种药品设置3个平行，并设1个对照（CK），然后随机放入5尾罗非鱼并将瓶口拧紧隔绝外界空气，实验开始后连续360 min观测不同组别罗非鱼的存活率及行为反应情况。
1.2.2 二氧化氯应激实验
向5 L塑料瓶中注入浓度约为150 mg/L的二氧化氯溶液（用池塘水为基础水体进行配制），再加入20 mg/L的药品，每种药品设置3个平行，并设1个对照，然后随机放入5尾罗非鱼，试验开始后连续360 min观测不同组别罗非鱼的存活率及行为反应情况。
1.2.3 氨氮应激实验
向5 L塑料瓶中注入浓度约为80 mg/L的NH4CL溶液（用池塘水为基础水体进行配制），再加入20 mg/L的药品，混合均匀。每种药品设置3个平行，并设置1个对照，然后随机放入5尾罗非鱼，实验开始后连续360 min观测不同组别罗非鱼的存活率及行为反应情况。
三种应激实验中，以观察鱼呼吸停止后，即腮盖停止运动，并用玻璃棒敲击鱼体无任何反应作为死亡判断标准。
1.3 数据分析
采用SPSS19.0软件对所有数据进行单因素方差分析（One-Way ANOVA）和Duncan检验法统计分析（P<0.05）。数据用平均值±标准差（Mean±SD）表示。
2 结果与分析
2.1 三种应激实验中罗非鱼的存活率变化
2.1.1 缺氧胁迫下罗非鱼存活率
由表2可知，各组之间的差异不明显，84 min后存活率最高组为F组（86.67%），最低组为D组（53.33%）;104 min后存活率最高组为B组（53.33%），D组全部死亡;124 min后存活率最高组为E组（33.33%），A、C、D、CK组均死亡;144 min后存活率最高组为E组（33.33%），其余各组均死亡;360 min后各组均全死亡。
2.1.2 二氧化氯胁迫下罗非鱼存活率 在15 min时，B组与A组差异显著，两组均与其它组差异不显著。在30 min时，B组与E组差异不显著，与其它各组差异显著，C组和D组均与A组、F组、CK组差异显著，与E组差异不显著，A组的存活率最低，B组存活率最高。在45 min时，B组与各组差异均显著，B组存活率最高。60 min后B组与C组差异显著。75 min时，各组无显著差异，B组的存活率最高（100%），其余各组均死亡（表3）。
2.1.3 氨氮胁迫下罗非鱼存活率 在30 min时，A组与E组差异不显著
，A组和E组均与其它各组差异显著;180 min后，B组与F组差异不显著，B组和F组与其它各组差异显著;300 min后F组与各组差异显著
，存活率最高，E组存活率最低为0;360 min后，B组与各组差异显著
，F组与各组差异显著，F组的存活率（93.33%）在360 min内为最高（表4）。
2.2 三种胁迫下罗非鱼的行为反应
2.2.1 缺氧胁迫下罗非鱼的行为反应
實验开始时罗非鱼游动正常，随后逐渐游动缓慢，鱼体失去平衡，部分罗非鱼集中于瓶口快速呼吸，个别上下急速窜动，接着出现游动无力的现象，仅有口鳃不断闭合，最终上浮后，坠入水底，反复几次，直到死亡。死亡鱼口张开，鱼体僵硬，鳃盖软化受损，鳍条伸直展开。D组反应最剧烈，E组反应较其余各组弱。
2.2.2 二氧化氯胁迫下罗非鱼的行为反应
实验进行15 min后开始出现应激反应，表现为失去平衡，浮头、沉入水底、上下激烈窜动，反应迟钝，侧躺水底不动，伴有侧游、转圈游动等现象，直接垂直缓落到瓶底，反复几次后死亡。A组反应最剧烈，B组无明显反应。
2.2.3 氨氮胁迫下罗非鱼的行为反应
实验进行30 min后开始出现应激现象，表现为上下窜游、水中急速跳跃、转圈，直接游出水面急促呼吸，接着腹部上翻，腹面朝上斜游，活力减弱，反复数次后腹面朝上死亡。E组反应最剧烈，F组反应较其余各组弱。
3 结论与讨论
3.1 缺氧胁迫下对罗非鱼行为反应及存活率的影响
生产中造成鱼类缺氧浮头的主要原因有养殖过程中放养密度过大、池水过肥、施肥不当、水质污染、投饲过量、天气突变等[8]，以及在鱼类的运输中，密闭的箱体和高密度的群体也极易造成鱼类缺氧，使鱼类出现浮头，长时间的缺氧会使鱼类出现死亡。当鱼类在受到外界环境因素的不良刺激后会引发体内的保护屏障，而使鱼体内产生一系列生理变化，即应激反应[9]。本研究发现，罗非鱼在缺氧胁迫下各组中的存活率无显著差异，在同一缺氧环境下，E组较其它各组的存活时间长，抗应激的能力较强。60 min后罗非鱼表现出应激反应，即游动缓慢、无力，反应迟钝，失去平衡，最后静卧水底死亡。在同一缺氧环境胁迫下，D组的反应最为强烈，存活率最低，A、B、C、F组次之，E组的反应最不强烈。
应激宝中的主要成分是免疫多糖，免疫多糖中富含具有免疫功能的β-葡聚糖和功能性的寡糖，β-葡聚糖作为免疫增强剂广泛应用于畜禽与水产养殖业[10]。有研究表明，β-葡聚糖能够提高齐口裂腹鱼肠道分泌性抗体的产生，增强肠道免疫功能，进而提高鱼体的抗病、抗应激功能[11]。本研究中，应激宝的使用增加了罗非鱼的非特异性免疫功能，提高了罗非鱼的抗缺氧能力，推测药品应激宝对罗非鱼在缺氧胁迫下有较好的缓解应激作用。
3.2 二氧化氯胁迫下对罗非鱼行为反应及存活率的影响
二氧化氯是水产养殖中的常用消毒剂，对细菌、芽孢和真菌等微生物具有很好的杀灭作用，且在低浓度下对水产动物无不良反应，同时二氧化氯作为强氧化剂，几乎可以分解水中所有还原性污染物质，如残剩饵料、排泄物等，极大程度地改善养殖水体[12];但高浓度下会对鱼类造成严重的伤害，产生应激反应，并致死。本研究发现，罗非鱼在同一质量浓度的二氧化氯胁迫下各组之间差异显著，B组的存活率最高（100%），有较好的抗二氧化氯胁迫能力。当水体中二氧化氯浓度为150 mg/L时，罗非鱼15 min后即表现出焦躁不安、上下窜动、浮头、反应迟钝等症状，最后呆滞于水底，失去平衡后死亡，这与唐洪玉等[13]研究的二氧化氯对湘云鲫的急性毒性试验中的中毒症状相似。在同一质量浓度的二氧化氯溶液中，A组的反应最为强烈，死亡率最高，C、D、E、F组的反应次之，B组的反应最不强烈。
VC，又称L-抗坏血酸，在动物生长发育、抗应激、免疫等方面均具有促进作用[14];宋学宏等[15]研究表明，在饲料中添加适量的VC可显著提高异育银鲫的免疫力，进而提高鱼体的抗病力;李志辉等[16]认为在饲料中添加VC可促进锦鲤的生长发育和增强其机体非特异性免疫能力。本研究中，在360 min后，B组的存活率最高（100%），其它各组均死亡，VC显著提高了鱼体的免疫力，增强了鱼体的抗病力和抗应激能力，有研究表明，VC还可通过神经调节因子，调节脑部的多巴胺和去甲肾上腺素的水平，从而控制鱼类的行为，增强其抗应激能力[17]。本研究证明，VC在罗非鱼抗二氧化氯胁迫中有较好的缓解应激作用。
3.3 氨氮胁迫下对罗非鱼行为表现及存活率的影响
本研究结果表明，罗非鱼在同一质量浓度的氨氮胁迫下，F组的抗应激能力较强，存活率最高。氨氮是养殖和运输水体中一种常见的毒性物质[18]，主要是由饵料的残留，动物的排泄物等产生的。氨氮对鱼类的毒害作用主要归因于其所包含的非离子氨的毒性[19]，当水体中离子氨的浓度较高时，会使鱼类发生氨中毒，出现应激反应。本研究中，罗非鱼刚开始表现出上下急速窜游、转圈，后表现为失去平衡，腹部朝上游动，最后侧卧瓶底，腹部朝上死亡，症状与樊海平等[20]研究的大刺鳅幼鱼在氨氮胁迫下的中毒症状相似。在同一质量浓度的氨氮溶液中，E组的应激反应比其它几组的要强烈，F组的反应最不强烈。
渔精元的主要成分是N-氨甲酰谷氨酸（NCG），有研究表明，大菱鲆幼鱼中添加适量NCG有助于促进机体内源精氨酸合成，提高肌肉中精氨酸的含量，进而促进蛋白质合成及提高机体免疫功能[21];NCG还具有修复肠道，提高鱼虾的抗应激能力和免疫力，从而抵抗外界的各种刺激。本研究中，360 min后存活率最高组为F组，渔精元与同浓度的另外5种药品相比显著提高了罗非鱼的免疫力和抗病能力，对氨氮胁迫有较好的缓解应激作用。
参 考 文 献：
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