方案及血浆样品采集 6只健康SD大鼠，雄性，平均体重约为230 g，分别尾静脉注射阿霉素载药纳米粒，给药剂量为5 mg/kg。给药后分别在0.087、0.167、0.25、0.33、0.5、1、2、4、6、10、24、48、72 h眼眶取血0.5 mL，取血后立即移入经肝素处理的试管中，4℃离心10 min（14 000 r/min），分离血浆，于-70℃冰箱中冷冻，待分析。
2.4.2 血浆样品测定 血浆样品的处理按照“2.1.2”项下方法进行，根据当日标准曲线，计算各时间点血浆中阿霉素的浓度，同时测定浓度为5、80、1600 μg/L的QC样品。血药浓度-时间曲线如图3所示。
2.4.3 药物动力学参数计算 采用DAS 3.0药动学软件处理，非隔室模型法计算阿霉素载药纳米粒注射后的主要药动学参数。其中AUC0-t为（2585±273）μg·h/L，AUC0-∞为（2854±240）μg·h/L，ke为（0.03±0.01）/h，t1/2为（28.40±7.27）h，tmax为（0.08±0.00）h，V为（71.87±18.07）L/kg，血浆清除率为（1.76±0.15）L/（h·kg），Cmax为（3253±968）μg/L。
3 讨论
3.1 液相条件的考察
有机相为甲醇时，阿霉素的响应比用乙腈时高约1.5倍；水相为0.1%冰醋酸时，阿霉素的响应比0.1%甲酸高约1.2倍；采用梯度洗脱时，阿霉素和内标的峰形良好，无拖尾。最终确定以甲醇-0.1%冰醋酸作为水相，甲醇作为有机相，梯度洗脱。
3.2 测定方法的比较
文献中虽然已有LS-MS/MS法测定阿霉素体内浓度的报道[13-15]，但多采用氯仿-甲醇（4∶1）和乙酸乙酯进行液液萃取，样品处理较复杂，且血浆用量大，本研究只需要大鼠血浆50 μL，文献中分别使用200 μL和400 μL，是本研究的4倍和8倍。虽然定量下限最低可以达到1.0 μg/L，但血浆样品处理方法比较复杂，采用乙腈沉淀蛋白后，将上清液取出用氮气吹干，再用流动相复溶，灵敏度虽高，但制样过程时间较长；同时，阿霉素的出峰时间为4.9 min，约为本研究的2倍。本研究采用甲醇直接沉淀蛋白，处理方法简单，阿霉素在给药后2.58 min左右出峰，大大缩短了分析时间。
本研究建立的大鼠血浆中阿霉素浓度测定的LC-MS/MS法，样品处理方法简单、专属性强、分析时间快，能够满足阿霉素纳米粒在大鼠体内的药动学研究。
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（收稿日期：2014-08-10 本文编辑：程 铭）
