[摘要] 目的：探讨大鼠急性重症胰腺炎（SAP）与肠黏膜屏障的关系以及鱼油干预的影响，为临床营养支持提供依据。方法：用3.5%牛磺胆酸钠逆行胰胆管注射法诱导SAP模型。48只成熟SD大鼠造模成功后分为两组，生理盐水组（A组，n=24），鱼油干预组（F组，n=24），分别于造模后给予尾静脉营养支持，与实验后6、12、24 h分别处死各组的其中8只大鼠,观察各自胰腺、小肠病理变化并测定其血清内毒素浓度。结果：F组门静脉血内毒素水平低于A组（P<0.05）；F组肠道损伤评分低于A组（P<0.05）。结论：添加静脉鱼油营养支持能降低SAP时门静脉血中的内毒素水平、促进肠道黏膜的修复、加强肠黏膜屏障的保护作用。
[关键词] 鱼油；肠黏膜屏障；内毒素；急性重症胰腺炎
[中图分类号] R-332[文献标识码]A [文章编号]1674-4721（2011）04（a）-０20－０2
Protective effect of fish oil on intestinal mucosa barrier in severe acute pancreatitis rats
WANG Peng1, WU Hua2*
1.Shanxi Medical University, ShanxiProvince, Taiyuan 030001, China; 2.Department of General Surgery, the First Hospital of Shanxi Medical University, ShanxiProvince, Taiyuan 030001, China
[Abstract] Objective: To investigate the protective effect of fish oil on intestinal mucosa barrier in severe acute pancreatitis (SAP) rats. Methods: 48 SD rats were divided into 2 groups at random (A,F), 24 in each group, group A was given saline water, group F was given fish oil, established model of intestinal injury after feeding rats 6 hours, then group A was given saline water, group F was given fish oil untill be killed. To measured concentration of endotoxin (ET) in portal vein blood supernatant after 6, 12 and 24 hours. Results: Serum ET concentration in group F was significantly lower than group A (P<0.05). The degree of injury of intestinal mucosa was much lower in group F than group A. Conclusion: The fish oil can prevent the intestinal mucosa barrier in SAP.
[Key words] Fish oil; Intestinal mucosa barrier; Endotoxin; Severe acute pancreatitis
急性重症胰腺炎（severe acute pancreatitis, SAP）在临床上起病凶险，发病率高，死亡率高，引起全身广泛炎症反应，容易导致肠黏膜屏障功能的损伤。鱼油在维持肠黏膜形态、保护肠黏膜屏障、防止细菌易位等方面具有积极的作用。本研究通过对急性重症胰腺炎（SAP）大鼠给予静脉鱼油营养支持，观察其对肠黏膜的保护作用，为临床应用提供依据。
1资料与方法
1.1动物与试剂
健康成年SD大鼠48只，雌雄各半，体重210~240 g。内毒素检测采用鲎试剂偶氮显色法，显色基质鲎试剂盒购自厦门鲎试剂实验厂有限公司。
1.2 动物模型的建立
按人工胰胆管逆行灌注法复制SAP模型，术前12 h禁食，自由饮水，2%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉（40 mg/kg），上腹正中切口入腹，轻柔提出十二指肠和游离胰腺，用微动脉夹夹闭肝门处总胆管使之扩张，通过1 ml注射器向胆胰管内匀速注射3.5%牛磺胆酸钠（2 ml/kg），输注结束后留置针头5 min，保持胰管内压力，移去动脉夹后，拔针、关腹、注意無菌操作。
1.3实验分组
48只健康SD大鼠，质量为210～240 g，随机分为生理盐水组（A组，n=24)，鱼油组（F组，n=24）。分别通过尾静脉营养输入0.9%NaCl溶液和鱼油。鱼油（奥地利费森尤斯卡比公司制）。术后饲养期间，禁食自由饮水。
1.4检测指标
造模成功、营养支持后，在6、12及24 h随机每组各取8只大鼠抽取门静脉取血及切取胰腺、小肠组织。并于取材完毕后处死相应大鼠。①血清内毒素水平检测：用无热源注射器穿刺门静脉取2 ml全血，经低温离心后吸出上清液置于采血管中于-20℃冰箱中密封保存，内毒素水平检测采用鲎试剂偶氮显色法。②组织损伤程度评估：于距回盲部2 cm处取小肠1 cm及胰腺，用10％甲醛液固定并制成石蜡切片，行苏木精-伊红染色，采用双肓法在光镜下观察组织损伤程度。
1.5统计学方法
所得资料用均数±标准差（x±s）表示，所有数据应用SPSS 16.0软件处理，血清学指标比较采用单因素方差分析，P＜0.05 表示差异有统计学意义。
2结果
2.1血浆内毒素水平
营养支持治疗后不同时间点两组大鼠血浆内毒素水平的比较见表1，治疗后6 h两组大鼠血浆内毒素水平差异无统计学意义（P＞0.05），第12、24小时F组大鼠血浆内毒素水平较A 组明显降低（P<0.05）。
2.2 形态学观察结果
A 组大鼠肠黏膜水肿、萎缩、坏死，肠绒毛排列紊乱、稀疏，上皮细胞脱落。F 组大鼠与A 组大鼠比较，肠黏膜病变明显减轻，肠黏膜及绒毛高度明显增加，绒毛轻度水肿，排列较为整齐、致密，小肠黏膜损伤情况判定评分较低（P<0.05）。
3讨论
目前认为肠黏膜一般由机械、免疫、生物及化学屏障四部分构成，肠黏膜通透性是评价肠黏膜屏障的重要指标之一[1]。SAP急性期机体表现为过度的炎症反应可导致免疫功能受损、感染和其他并发症明显增加，造成肠黏膜通透性、血中内毒素、肿瘤坏死因子、一氧化氮等水平明显增高，肠黏膜屏障通透性的增高，使机体的内环境失衡[2]。肠道中的细菌及内毒素侵入体内造成肠源性内毒素血症；内毒素血症又反过来进一步扩大肠黏膜通透性,促使肠道的细菌和内毒素不断侵入体内形成恶性循环[3]。上述活性物质的相互作用，表现为级联反应, 使机体损伤不断加重甚至衰竭[4]。所以，检测危重患者肠黏膜屏障的通透性对监测肠源性感染的发生并尽早采取各种有效的治疗具有重要意义，证明SAP时肠黏膜屏障功能的改变是研究SAP病理生理改变的重要环节。
鱼油（fish oil）是近年来研究比较多的一种重要免疫调理性营养素，其中富含大量的n-3多不饱和脂肪酸EPA （eicosapen taenoic acid）及DHA（docosahexaenoic acid）[5]，不仅能使血液循环中TNF, IL-6表达水平下降，而且也能使小肠黏膜中TNF mRNA 的表达水平明显降低。最近据相关文献报道，鱼油具有抑制多种致炎物质介导的组织损伤及不良反应的作用[6-7]。在重症感染患者营养支持的同时，添加富含n-3 脂肪酸的鱼油, 有助于减轻机体的炎性反应并同时降低感染对肠黏膜屏障造成的损伤，起到对肠黏膜屏障的保护作用[8]。鱼油保护肠黏膜屏障的机制是EPA与细胞膜磷脂结构结合,部分性与花生四烯酸（ARA）产生竞争作用。减少ARA参与产生的二十烷类的表达[9]。这样，鱼油减少了前列腺素（如PGE2）和白三烯（如LTB-4）的产生，从而，ω-3脂肪酸就可以降低血小板聚集、血液凝固、平滑肌收缩和白细胞的趋化作用，调节炎性细胞因子的表达以及调理机体的免疫功能，增加肠黏膜的血液灌流、降低肠黏膜局部细胞因子的表达、阻断细胞因子对肠黏膜结构功能及细胞代谢的不利影响。此外,鱼油还可以使TNF-α、IL-10浓度明显降低,且下调IL-10/TNF-α的比值使促炎、抗感染反应减轻，最接近促炎抗感染的平衡状态并且在改善肠蠕动、抑制血小板聚集、延长凝血时间、增加生物膜的液态性、改变红细胞的可塑性、降低血液黏滞等方面的作用也有利于肠黏膜的保护。PN支持能减轻SAP患者早期存在的过度炎症反应,尤其是添加鱼油的PN支持能更好地使患者的炎症反应减轻，一定程度上对器官功能的保护具有积极的作用 [10]。研究表明，鱼油脂肪乳有提高机体清除正在及已经易位的细菌和内毒素水平的能力并使易位的内毒素生物学效应降低[11]。
本实验结果显示，添加鱼油的实验组大鼠肠黏膜的损伤明显减轻，内毒素水平明显下降（P<0.05），对肠黏膜结构有积极保护作用。以上结果进一步说明，添加鱼油的静脉营养具有较好的降低内毒素水平及促进肠黏膜屏障修复的作用，对临床肠内营养制剂的配置及改善患者的预后有重要意义。但是添加的剂量目前没有明确的定论，还需要进一步的实验研究。
[参考文献]
[1]Chiu CJ,MeArdle AH,Brown R,et al.lntestinal mueosal lesion in low flow states.I.Amorphologlcal,hemodynamie,and metabolic reappraisal[J].Arch Surg,1970,101(4):478-483．
[2]Murray MJ, Gonze MD, Nowak LR, et al. Serum D(-) 2lactate levels as an aid to diagnosing acute intestinal ischemia[J].Am J Surg,1994,167(6):575-578.
[3]Duplus E, Forest C. Is there a single mechanism for fatty acid regulation of gene transcription[J].Biochemical Pharmcology,2002,64(5):893-901.
[4]Neumann B, Zantl N, Veihelmann A, et al. Mechanisms of acute inflammatory lung injury induced by abdominal sep sis [J].Int Immunol,1999,11(2):217-227.
[5]Heller AR, Rossler S, Litz RJ, et al. Omega- 3 fatty acids improve the diagnosis-related clinical outcome [J]. Crit Care Med, 2006,34(4):972-979.
[6]SchmEcker C,Weylandt KH, Kahlke L, et al. Omega-3 fatty acids alleviate chemically induced acute hepatitis by supp ression of cytokines [J]. Hepatology, 2007, 45(4): 864-869.
[7]Watanabe S, Kanada S, Takenaka M, et al. Dietary n-3 fatty acids selectively attenuate LPS-induced behavioral dep ression in mice [J]. Physiol Behav, 2004, 81(4):6052613.
[8]王新穎,黎介寿. ω-3多不饱和脂肪酸影响炎症和免疫功能的基础研究[J].肠外与肠内营养,2007,14(1):54-58.
[9]Holub BJ, Bakker DJ , Skeaff CM. Alterations in molecular species of cholesterol esters formed via plasma lecithin-cholesterol acyltransferase in human subjects consum ing fish oil[J].Atherosclerosis,1987, 66 (1-2):11.
[10]Marc E. The science behind dietary omega- 3 fatty acids[J].Can Med Asso J, 2008, 178(2):177-180.
[11]Pscheidl E, Schywalsky M, Tschaikowsky K, et al. Fish oil- supplemented parenteral diets normalize splanchnic blood flow and improve killing of translocated bacteria in a low dose endotoxin rat model[J].Crit Care Med, 2000,28(5):1489-1496.
（收稿日期：2011-01-25）
注：本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文
